पीसीआर विश्लेषण: यह क्या है? पीसीआर परीक्षण को कैसे सही ढंग से लिया जाए

इतना समय पहले, एक विश्वसनीय,किसी व्यक्ति के विभिन्न संक्रामक रोगों के निदान की एक अति संवेदनशील और तीव्र पद्धति। इस विधि को "पीसीआर विश्लेषण" कहा जाता है यह क्या है, इसका सार क्या होगा, यह किस सूक्ष्मजीव को प्रकट कर सकता है और इसे ठीक से कैसे हाथ से निकाल सकता है, हम अपने लेख में बताएंगे।

खोज का इतिहास

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) की विधि की खोज की1 9 83 में अमेरिकी वैज्ञानिक कैरी मायूलिस। शुरू में कंपनी "सीट्स कॉर्पोरेशन" द्वारा निदान की विधि का पेटेंट कराया, जिसमें उनके निर्माता ने काम किया लेकिन 1 99 2 में कंपनी के सभी अधिकार और पेटेंट "हॉफमैन-ला रोश" को बेच दिए गए थे। उसके बाद, यह प्रकट हुआ कि समानांतर समान अध्ययन किए गए और अन्य अमेरिकी जीववैज्ञानिकों जैसे एलिस चेन, डेविड एडगर, जॉन ट्रेल द्वारा दर्ज किए गए थे। 1 9 80 में, सोवियत वैज्ञानिक ए। स्लीयुसेनको, ए। केलडीन और एस। गोरोदत्सेकी ने इस समस्या से निपटाया। इसलिए, एकमात्र रिथोल्डर को निर्धारित करना असंभव था कई बकाया जैव रसायनज्ञों ने पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया पद्धति के विकास में योगदान दिया है और उनके नवाचारों का पेटेंट कराया है। फिलहाल, विशेष रूप से सुसज्जित प्रयोगशालाओं में हर जगह पीसीआर विश्लेषण किया जाता है।

पीसीआर निदान पद्धति का सार

पीसीआर विश्लेषण: यह क्या है और यह कैसे काम करता है? विधि का सार कृत्रिम स्थितियों के तहत डीएनए पोलिमरेज़ के एक विशेष एंजाइम के माध्यम से एक विशिष्ट माइक्रोबियल माध्यम में वृद्धि करना है। ऐसा करने के लिए, मौजूदा डीएनए सामग्री को गुणा करें इस प्रकार, नमूने में एक रोगजनक सूक्ष्मजीवन की उपस्थिति में, इसकी मात्रा जैव रासायनिक प्रयोगशाला में जोड़-तोड़ के माध्यम से बढ़ेगी, और सूक्ष्मदर्शी में जीवाणु आसानी से पहचाना जा सकता है।

पीसीआर विश्लेषण - यह क्या है?

भौतिक अनुसंधान कैसे किया जाता है?

विश्लेषण की आवश्यकता है:

  • डीएनए टेम्पलेट;
  • सामग्री के एक टुकड़े के छोर को जोड़ने प्राइमरों;
  • एक तापीय स्थिर डीएनए पोलीमरेज़ एंजाइम;
  • रासायनिक पदार्थ जो कि एंजाइमों के उचित कार्य को सुनिश्चित करते हैं;
  • डीएनए सामग्री के विकास और विकास के लिए उचित परिस्थितियों को बनाने के लिए एक बफर समाधान आवश्यक है।

    पीसीआर विश्लेषण 12

पीसीआर जारी करने के लिए, 25-30 दोहराव किए जाते हैं, जिसमें तीन चरणों होते हैं: विकृति, एनेलिंग और बढ़ाव

पोलीमरेज़ चेन रिलेक्शन के विश्लेषण के लिएएक विशेष उपकरण का उपयोग करें - एक एम्पलीफायर आधुनिक उपकरण आपको निदान के दौरान त्रुटियों को खत्म करने के लिए ट्यूबों को हीटिंग और ठंडा करने के लिए आवश्यक प्रोग्राम सेट करने की अनुमति देता है।

निदान का उपयोग कहां किया जाता है?

पॉलिमरस चेन प्रतिक्रिया की विधि दवा के विभिन्न क्षेत्रों में उपयोग की जाती है:

  • फोरेंसिक वैज्ञानिक इसका उपयोग आनुवांशिक सामग्री, जैसे बाल, लार या रक्त की पहचान के लिए करते हैं;
  • पीसीआर रक्त विश्लेषण जीनोटाइपिंग के साथ मदद करता है, उदाहरण के लिए, एक विशिष्ट दवा के लिए एक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर प्रतिक्रिया का पता लगाने के लिए;
  • इस तरह की एक विधि की सहायता से लोगों के बीच पारिवारिक संबंधों का अस्तित्व स्थापित किया गया है;
  • विभिन्न संक्रामक बीमारियों की परिभाषा के लिए सबसे लोकप्रिय पीसीआर विधि चिकित्सा निदान में बन गई है।

क्या संक्रमण पीसीआर प्रकट करता है?

इसलिए, दवा लंबे समय से और सफलतापूर्वक पीसीआर के विश्लेषण का उपयोग किया है। यह क्या है, हम पहले से ही सीखा है। और इसके साथ कौन से रोगजनकों का पता लगाया जा सकता है? पीसीआर द्वारा निम्नलिखित संक्रामक बीमारियों का निदान किया जाता है:

  • हेपेटाइटिस ए, बी, सी;
  • ureaplasmosis;
  • कैंडिडिआसिस;
  • क्लैमाइडिया;
  • mycoplasmosis;
  • बैक्टीरियल वगिनोसिस;
  • संक्रामक mononucleosis;
  • trichomoniasis;
  • पेपिलोमावायरस संक्रमण;
  • तपेदिक;
  • 1 सेंट और 2 वें प्रकार के हर्पी संक्रमण;
  • हेलिकोबेक्टर संक्रमण;
  • cytomegalovirus;
  • डिप्थीरिया;
  • सलमोनेलोसिज़;
  • एचआईवी संक्रमण

    एचआईवी के लिए पीसीआर विश्लेषण

इसके अलावा, कैंसर के निदान में पीसीआर विधियों का उपयोग किया जाता है।

विधि के फायदे

निदान पीसीआर के कई फायदे हैं:

  1. उच्च संवेदनशीलतासूक्ष्मजीव के केवल कुछ डीएनए अणुओं के साथ भी, पीसीआर विश्लेषण संक्रमण की उपस्थिति को निर्धारित करता है। विधि पुरानी और गुप्त बीमारियों में मदद करेगी। अक्सर ऐसे मामलों में, सूक्ष्मजीव अन्य तरीकों से अनगिनत होता है।
  2. अध्ययन के लिए, लार, रक्त, लिंग, बाल, उपकला कोशिकाओं जैसे किसी भी सामग्री उपयुक्त है। सबसे आम रक्त परीक्षण और पीसीआर पर यूरोजेनिक स्मीयर है।

    पीसीआर: परीक्षा लें

  3. इसे लंबी अवधि की फसल की खेती की आवश्यकता नहीं है। स्वचालित डायग्नोस्टिक प्रक्रिया आपको 4-5 घंटे के बाद अध्ययन के परिणाम प्राप्त करने की अनुमति देती है।
  4. विधि लगभग 100% भरोसेमंद है। झूठी नकारात्मक नतीजे के केवल एक ही मामले दर्ज किए गए थे।
  5. कई प्रकार की पहचान करने की क्षमतासामग्री के एक नमूने से रोगजनक। यह न केवल रोग का निदान करने की प्रक्रिया को गति देता है, बल्कि भौतिक लागतों में भी काफी कमी करता है। अक्सर, डॉक्टर एक व्यापक पीसीआर विश्लेषण निर्धारित करता है। छह रोगजनकों की परिभाषा से युक्त परीक्षा की कीमत लगभग 1500 रूबल है।

विश्लेषण के लिए तैयारी के लिए सिफारिशें

परिणाम पीसीआर अध्ययन में भरोसेमंद होने के लिए, निदान के लिए प्रारंभिक तैयारी के लिए सिफारिशों के बाद विश्लेषण किया जाना चाहिए:

  1. लार छोड़ने से पहले, आपको सामग्री लेने से 4 घंटे पहले भोजन और दवा लेने से बचना चाहिए। प्रक्रिया से तुरंत, उबले हुए पानी के साथ अपने मुंह को कुल्लाएं।
  2. गाल की भीतरी सतह से नमूना लेने पर उपर्युक्त नियमों का पालन किया जाना चाहिए। धोने के बाद, यह सिफारिश की जाती है कि ग्रंथि के स्राव को अलग करने के लिए एक हल्की त्वचा मालिश की जाती है।
  3. मूत्र आमतौर पर घर पर कटाई की जाती है।ऐसा करने के लिए, आपको जननांगों का एक संपूर्ण शौचालय आयोजित करने की आवश्यकता है। एक बाँझ प्लास्टिक कंटेनर में 50-60 मिलीलीटर मूत्र जमा करना आवश्यक है। सामग्री की शुद्धता सुनिश्चित करने के लिए, यह सिफारिश की जाती है कि महिलाएं योनि में एक टैम्पन डालें, और पुरुष अधिकतम त्वचा की तह खींचें। आप मासिक धर्म प्रवाह के दौरान सामग्री नहीं ले सकते हैं।
  4. शुक्राणु के लिए आपको यौन से बचना चाहिएसंग्रह से 3 दिन पहले कार्य करें। इसके अलावा, डॉक्टर सौना देखने और गर्म स्नान करने, शराब पीने और मसालेदार भोजन पीने से इनकार करने की सलाह देते हैं। परीक्षण से 3 घंटे पहले, आपको पेशाब से बचना चाहिए।
  5. यूरोजेनिक स्मीयर के वितरण के लिए, उदाहरण के लिए यदिएक क्लैमाइडिया पीसीआर पर विश्लेषण करती है, दोनों महिलाओं और पुरुषों 3 दिनों के लिए यौन बाकी की सिफारिश की। विश्लेषण से पहले 2 सप्ताह एंटीबायोटिक दवाओं नहीं ले सकते। एक सप्ताह के लिए आप अंतरंग जैल, मलहम, योनि सपोजिटरी, douching का उपयोग बंद करने की जरूरत है। 3 घंटे अध्ययन करने से पहले पेशाब करने से बचना चाहिए। के दौरान मासिक धर्म बाड़ सामग्री बाहर नहीं किया जाता है, केवल 3 दिन खोलना की समाप्ति के बाद मूत्रजननांगी धब्बा लग सकता है।

गर्भावस्था के दौरान पीसीआर

बच्चे की कई संक्रामक उम्मीदों की अवधि मेंभ्रूण के सामान्य विकास के लिए यौन संक्रमित बीमारियां बेहद खतरनाक हैं। एसटीडी इंट्रायूटरिन वृद्धि मंदता, गर्भपात या समयपूर्व जन्म, बच्चे के जन्मजात विकृतियों को उत्तेजित कर सकते हैं। इसलिए, प्रारंभिक पीसीआर परीक्षण पास करना बेहद महत्वपूर्ण है। पंजीकरण करते समय विश्लेषण जमा करना आवश्यक है - 12 सप्ताह तक।

क्लैमिडिया पीसीआर पर विश्लेषण

बाड़ सामग्री गर्भाशय ग्रीवा नहर से निकलती हैएक विशेष ब्रश की मदद से। प्रक्रिया दर्द रहित है और बच्चे को खतरा नहीं है। आमतौर पर गर्भावस्था के दौरान, क्लैमिडिया का पीसीआर विधि, साथ ही यूरियाप्लाज्मोसिस, माइकोप्लाज्मोसिस, साइटोमेगागोवायरस, हर्पीस, और पेपिलोमावायरस द्वारा विश्लेषण किया जाता है। परीक्षाओं के इस तरह के एक जटिल को पीसीआर -6 कहा जाता है।

एचआईवी निदान के लिए पीसीआर

इस तथ्य के संबंध में कि बहुलक श्रृंखला प्रतिक्रिया की विधिप्रतिक्रिया शरीर में परिवर्तन और निदान की स्थितियों के प्रति बहुत संवेदनशील है, कई कारक परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं। इसलिए, एचआईवी संक्रमण के लिए पीसीआर विश्लेषण एक विश्वसनीय विधि नहीं है, इसकी प्रभावशीलता 96-98% है। शेष 2-4% मामलों में, परीक्षण झूठी सकारात्मक परिणाम देता है।

लेकिन एचआईवी के पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के बिना कुछ स्थितियों मेंप्रबंधन नहीं करना आम तौर पर यह झूठी-नकारात्मक ELISA परिणाम वाले लोगों को प्रशासित किया जाता है। ऐसे संकेतक इंगित करते हैं कि व्यक्ति ने अभी तक वायरस में एंटीबॉडी विकसित नहीं की हैं और उन्हें संख्या में कई वृद्धि के बिना पता नहीं लगाया जा सकता है। यह एक पीसीआर विधि का उपयोग कर रक्त परीक्षण आयोजित करके हासिल किया जा सकता है।

इसके अलावा, जीवन के पहले वर्ष के बच्चों के लिए यह निदान आवश्यक है जो एचआईवी पॉजिटिव मां से पैदा होते हैं। विधि एक बच्चे की स्थिति को विश्वसनीय रूप से निर्धारित करने का एकमात्र तरीका है।

हेपेटाइटिस के निदान के लिए पीसीआर

बहुलक श्रृंखला प्रतिक्रिया विधि की अनुमति देता हैसंक्रमण के प्रति एंटीबॉडी के गठन या बीमारी के लक्षणों की उपस्थिति से पहले हेपेटाइटिस ए, बी, सी वायरस के डीएनए का पता लगाएं। विशेष रूप से प्रभावी हेपेटाइटिस सी के लिए पीसीआर का विश्लेषण है, क्योंकि 85% मामलों में ऐसी बीमारी असीमित रूप से बढ़ती है और समय पर इलाज बिना किसी पुराने चरण में गुजरता है।

पीसीआर रक्त परीक्षण

रोगजनक का समय पर पता लगाने से जटिलताओं और लंबे समय तक इलाज से बचने में मदद मिलेगी।

व्यापक पीसीआर सर्वेक्षण

जटिल पीसीआर विश्लेषण: यह क्या है?यह परीक्षण विधि polimezarnoy श्रृंखला प्रतिक्रिया जो एक साथ कई प्रजातियों संक्रमण का निर्धारण भी शामिल है: माइकोप्लाज्मा genitalium, माइकोप्लाज्मा Hominis, गर्द्नेरेल्ला वेजिनेलिस, कैंडीडा, ट्रायकॉमोनास, cytomegalovirus, Ureaplasma urealitikum, दाद 1 और 2 प्रकार, सूजाक पेपिलोमा वायरस। इस निदान की कीमत 2,000 3,500 को रूबल से लेकर। क्लिनिक, सामग्री और उपकरणों के आधार पर है, साथ ही विश्लेषण के प्रकार पर: गुणात्मक या मात्रात्मक। क्या आपके मामले में की जरूरत है - डॉक्टर का फैसला किया। कुछ मामलों में, आप बस ऐसे एचआईवी, महत्वपूर्ण भूमिका मात्रात्मक अनुमापांक द्वारा निभाई के रूप में दूसरों, में रोगज़नक़ की उपस्थिति का पता लगाने। के रूप में "12 की पीसीआर विश्लेषण" ऊपर रोगजनकों परीक्षा के सभी के निदान में करने के लिए भेजा।

विश्लेषण परिणामों की व्याख्या

पीसीआर विश्लेषण का डीकोडिंग मुश्किल नहीं है।संकेतक के केवल 2 तराजू हैं - "सकारात्मक परिणाम" और "नकारात्मक परिणाम"। यदि रोगजनक का पता चला है, तो डॉक्टर 99% आत्मविश्वास के साथ रोग की उपस्थिति की पुष्टि कर सकते हैं और रोगी के इलाज के साथ आगे बढ़ सकते हैं। संबंधित कॉलम में संक्रमण का निर्धारण करने की मात्रात्मक विधि में, पता लगाए गए बैक्टीरिया का संख्यात्मक मूल्य इंगित किया जाएगा। केवल एक डॉक्टर बीमारी की डिग्री निर्धारित कर सकता है और आवश्यक उपचार निर्धारित कर सकता है।

पीसीआर विश्लेषण कहां पास करें?

कुछ मामलों में, उदाहरण के लिए, निर्धारण मेंपीसीआर विधि द्वारा एचआईवी संक्रमण, नकारात्मक परिणाम के साथ, परिणामों की पुष्टि करने के लिए अतिरिक्त परीक्षाएं आयोजित करना आवश्यक हो जाता है।

विश्लेषण कहां लेना है?

पीसीआर विश्लेषण कहां जमा करें:राज्य polyclinic या एक निजी प्रयोगशाला में? दुर्भाग्यवश, नगरपालिका चिकित्सा संस्थानों में, उपकरण और विधियां अक्सर पुरानी होती हैं। इसलिए, आधुनिक उपकरणों और अत्यधिक योग्य कर्मियों के साथ निजी प्रयोगशालाओं को वरीयता देना बेहतर है। इसके अलावा, एक निजी क्लिनिक में आपको परिणाम बहुत तेज़ी से मिलेंगे।

मास्को में, कई निजी प्रयोगशालाएं प्रदान करती हैंविभिन्न संक्रमणों पर पीसीआर विश्लेषण आयोजित करना। उदाहरण के लिए, वीटा, कॉम्प्लेक्स क्लिनिक, हैप्पी फैमिली, और यूरो-प्रो जैसे क्लीनिक में, पीसीआर विश्लेषण किया जाता है। परीक्षा की कीमत 200 rubles से है। एक रोगजनक की परिभाषा के लिए।

यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि संक्रामक का निदानअधिकांश मामलों में पीसीआर संक्रमण के शुरुआती चरणों में शरीर में रोगजनक का पता लगाने का एक तेज़ और विश्वसनीय तरीका है। लेकिन कुछ मामलों में यह निदान के अन्य तरीकों का चयन करने योग्य है। इस तरह के एक अध्ययन करने की आवश्यकता केवल एक विशेषज्ञ द्वारा निर्धारित किया जा सकता है। पीसीआर विश्लेषण को डीकोड करने के लिए एक पेशेवर दृष्टिकोण की भी आवश्यकता होती है। डॉक्टर की सिफारिशों का पालन करें और अपने आप को परीक्षण न करें, जो आवश्यक नहीं हैं।

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